5 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Иммуноферментный анализ ифа

Что такое анализ крови на ИФА

Развитие современной медицины в мире диагностики не перестает удивлять своими достижениями, и теперь врачу нет необходимости высказывать предположения о вероятном диагнозе, опираясь лишь на косвенные признаки. Создание и введение в мир лабораторных исследований иммуноферментного анализа крови (ИФА) позволяет быстро и точно определить не только наличие возбудителя, но и многие другие характеристики заболевания.

История создания и развития ИФА

Данный метод исследования крови стал применяться в практической медицине еще в середине прошлого столетия – где-то в 60-х годах. Изначальной его целью были научные исследования в области гистологии, которые ограничивались поиском и изучением клеточной антигенной структуры биологических видов. Анализ крови методом ИФА основан на взаимодействии родственных антигенов (АГ) и специфических антител (АТ), с формированием комплекса «антиген-антитело», определяемого ферментом.

Такой феномен подтолкнул ученых к решению, что способ можно применять для распознавания белковых соединений различных классов, образующихся в сыворотке крови при попадании в организм возбудителя. Из-за своей непосредственной вовлеченности в функционирование иммунной системы эти соединения получили название иммуноглобулины (ИГ, Ig), а открытие стало величайшим прорывом в лабораторной диагностике.

При этом активно использовать этот высокочувствительный метод стали лишь в 80-х годах, и доступен он был только в узкоспециализированных медицинских учреждениях. Самыми первыми получили возможность пользоваться иммуноферментными анализаторами станции и центры переливания крови, венерологические и инфекционные лечебные заведения. Это было связано со стремительным распространением «чумы XX века» – СПИДа, и требовалось срочное принятие диагностических и терапевтических мер.

Возможности методики

Область применения анализа крови на ИФА довольно широка – на данный момент невозможно и представить, насколько бы усложнились поиски причины множества заболеваний. Такое исследование теперь применяется практически во всех медицинских отраслях, даже в онкологии. Хоть для неосведомленных это сложно понять, но в отдельных случаях проведя его, удалось спасти жизнь пациентам, обнаружив опухоль на ранних стадиях.

В современных диагностических центрах, лабораторные обследования представлены не только онкомаркерами – они снабжены внушительным арсеналом панелей для проведения данной диагностики. С их помощью можно определить множество патологических состояний, таких как гормональные отклонения и инфекционные процессы различного происхождения.

Кроме этого, проведение и расшифровка анализа крови ИФА даст возможность отследить действие медицинских препаратов на организм больного человека и даже животного. Последнее широко применяется в ветеринарных клиниках, помогая сохранить здоровье нашим домашним питомцам либо кормильцам, обеспечивающим стабильное поступление мясной, молочной продукции и незаменимых в рационе яиц.

Так, в результате забора всего нескольких миллилитров венозной крови и ее диагностики методикой ИФА, врач, описав материалы исследования, сможет определить:

  • гормональное состояние, включающее биологически активные вещества половых и щитовидной желез, а также надпочечников;
  • наличие бактериальной и вирусной инфекции (гепатит В и С, сифилис, герпес, хламидиоз, туберкулез, мико- и уреаплазмоз, ВИЧ, TORCH) и другие заболевания данной природы;
  • признаки жизнедеятельности возбудителей патологического процесса, завершившегося выздоровлением и перешедшего в стадию образования антител (иммунного ответа).

Такие комплексы гораздо проще распознаются и ликвидируются клетками иммунитета. Остаточные явления в виде антител во множественных случаях содержатся в крови пожизненно, что практически сводит риски повторного заражения к нулю.

Разновидности иммуноглобулинов

Существует несколько видов антител, причем каждый из них вовлекается в процесс иммунного ответа на определенном этапе. К примеру, первыми в ответ на попадание АГ в организм образовываются иммуноглобулины класса М (IgM). Самые высокие их показатели наблюдаются в первые дни заболевания.

Затем иммунная система запускает в плазму ИГ класса G (IgG), ответственные за полное уничтожение антигенов и выздоровление больного. Позже они так и продолжают находиться в крови, тем самым подготавливая иммунитет к повторному попаданию идентичного возбудителя. По такому принципу работает вакцинация. При введении ослабленных антигенов патологических микроорганизмов, в плазме появляется и остается циркулировать много иммуноглобулинов.

И, впоследствии, если происходит патогенный контакт, они быстро справляются с инфекцией, уберегая организм от угрозы здоровью. IgА в большом количестве сосредоточены в слизистых оболочках, преграждая попаданию внутрь организма болезнетворных вирусов и бактерий. IgЕ ответственны за уничтожение паразитарных инфекций, а также существует множество других иммуноглобулинов, участвующих в ответе иммунитета.

Основными интересующими объектами для лабораторной диагностики считаются Ig классов M, G и A. По уровню их концентрации можно определить стадию заболевания и узнать, какими инфекционными болезнями человек болел в своей жизни. Например, можно проверить была ли в анамнезе ветряная оспа или краснуха. Врачу, чтобы узнать присутствует ли определенный вид АТ или АГ в организме пациента или концентрацию какого-либо гормона, нет необходимости назначать множественные лабораторные обследования – достаточно выписать направление на ИФА.

Суть методики

Иммуноферментный анализ крови на паразитов и других микроорганизмов – вредителей здоровью организма дает возможность не только установить наличие возбудителей, но и расскажет об их численности в плазме крови пациента. Таким образом, подобное исследование позволяет произвести и качественный и количественный анализ патогенных микроорганизмов, обнаруженных в сывороточном материале.

Уровень концентрации возбудителя в значительной мере оказывает влияние на развитие инфекции и скорость выздоровления, поэтому качественная оценка считается не менее важной, чем количественная. Ей отводится далеко не последняя роль как при лечении детей, так и взрослых. Но как же получается, что ИФА удается распознавать такой обширный диапазон микроорганизмов, которые паразитируют в теле человека и животных, принося вред и снижая качество жизни?

Методика исследования строится на нескольких вариантах (прямой и непрямой – конкурентный и неконкурентный) выполнения поставленных задач, причем каждый из них предназначен для определенных целей. Такой подход позволяет производить целенаправленный поиск, и в кратчайшие сроки выявлять причину той или иной патологии. Для обнаружения Ig разных классовых категорий применяется 96-луночный планшет (полистироловая панель), а в его лунках расположены сорбированные рекомбинантные белки. Они исполняют роль антигенов, и на начальном этапе находятся в твердой фазе.

При попадании в лунку с плазмой крови, антигены или антитела идентифицируют в связи со своей направленностью объект, и формируют комплекс (АГ – АТ). Данное образование закрепляется ферментным соединением (коньюгатом), который впоследствии проявится измененным окрашиванием лунки. ИФА производится на специфических тест-системах, изготовленных в профильных лабораториях и укомплектованных полным набором реагентов.

Данный анализ можно выполнять на вошерах – промывных аппаратах и считывающих спектрофометров, но они требуют ручного труда. Безусловно, лаборанту в несколько раз удобнее и быстрее осуществлять все манипуляции на полностью автоматизированных приборах. При их использовании сотрудники лаборатории освобождаются от большого объема монотонной деятельности – промывания, закапывания и остальной рутины, но не все лечебные учреждения могут себе позволить такую дорогостоящую аппаратуру

Интерпретация материалов исследования исключительно компетенция специалиста лабораторной диагностики – только ему могут рассказать результаты о специфике и тонкостях протекания заболевания. При этом врач должен обязательно учесть возможность получения ложноотрицательных или ложноположительных ответов.

Расшифровка материалов

Итогом качественной иммуноферментной диагностики должно стать однозначное заключение – найден искомый микроорганизм или нет в данном образце крови. Количественный анализ будет указывать на уровень концентрации и может выражаться двумя способами – значением в цифрах либо количеством знаков «+».

Анализируемые показатели

В процессе исследования производится тщательное изучение основных иммуноглобулинов, вовлеченных в иммунный ответ, таких как:

  • IgM – обнаружение данного класса означает развитие острой формы инфекционного заболевания. Отрицательный результат по поиску IgM может быть как свидетельством отсутствия искомого возбудителя, так и перехода болезни в хроническое течение.
  • IgА – определение этого класса при отсутствии IgM в большинстве случаев сигнал о хронической либо скрытой форме развития инфекционной болезни.
  • IgM и IgА (одновременное наличие) – положительные результаты на оба вида свидетельствует о самом пике острой формы патологии.
  • IgG – его наличие указывает на трансформацию заболевания в хроническую форму либо на выздоровление и формирование иммунитета к определяемому агенту.

Появление и накопление определенного класса ИГ происходит на разных временных этапах. Так, к примеру, первыми появляются IgM, приблизительно на 5 день от попадания возбудителя. ИГ находятся в крови около 5–6 недель, и затем постепенно пропадают. В это время они доступны к определению посредством ИФА. Ориентировочно через 3–4 недели от начала болезни появляются IgG, которые впоследствии могут оставаться на протяжении нескольких месяцев. Но в анализе их не всегда удается обнаружить.

IgА образуются в крови в период 2–4 недели, при этом 20% их содержится в сыворотке, а 80% – в секрете слизистых оболочек. Как правило, эти иммуноглобулины пропадают на протяжении 2–9 недель, что свидетельствует об уничтожении возбудителя и выздоровлении больного. Если же ИФА все же показывает наличие IgА, то это сигнализирует о переходе процесса в хроническую форму.

Варианты результатов анализа

В зависимости от полученных данных, ответы ИФА могут быть выданы на бланке в виде таблицы с полным списком всех АТ и АГ и указанием положительной либо отрицательной реакции. В определенных ситуациях будет выведено количественное значение – резко положительный, положительный, слабоположительный или отрицательный результат. Второй вариант указывает на количество содержащихся АТ в изучаемом образце крови.

Кроме вышеперечисленных значений, в процессе ИФА исследуется еще один количественный параметр – индекс авидности АТ, исчисляющийся в процентах. Он показывает, сколько длится заболевание – то есть чем выше показатель, тем больше времени идет развитие патологии.

Альтернативный способ ИФА

Иммуноферментный анализ крови – достаточно известная и распространенная диагностика. Возможно, о ней никогда и не слышали некоторые, но существует одна еще менее известная широкому кругу людей разновидность данного исследования, при котором берется образец не крови. Эта методика называется анализ кала на скрытую кровь, и во многих случаях она позволяет избежать дополнительных изнуряющих процедур, к тому же еще сопровождающихся неприятными ощущениями.

Анализ ИФА на скрытую кровь (молекулы гемоглобина) дает возможность обнаружить кровотечение органов пищеварительной системы, даже незначительное, признаки которого в стуле больного, как говорится, невооруженным глазом не найти. Иммуноферментный анализ скрытой крови в испражнениях человека за короткое время способен показать язвенную болезнь, полипоз, дивертикулез, опухоли, которые на ранних стадиях не сопровождаются определенной симптоматикой.

На сегодняшний день созданы тысячи разновидностей тест-систем иммуноферментной диагностики, которые предоставляют возможность находить АТ и АГ огромного списка патологий. Поэтому данный анализ применяется почти во всех отраслях медицины, для любой возрастной категории. А абсолютная безвредность позволяет прибегать к нему и при беременности, и для диагностики ослабленных пациентов.

Что такое ИФА анализ крови и почему это важно для диагностики

ИФА анализ крови, что это такое? Наверное, все помнят, что в ответ на проникновение вирусов для борьбы с ними организм начинает вырабатывать комплексы антител. Эти иммунологические соединения обладают способностью распознавать и уничтожать «свой» возбудитель. На этом и построено исследование, которое позволяет определить наличие и количество иммуноферментов, свойственное для определенного заболевания.

Немного общих сведений об анализе

ИФА, или иммуноферментный анализ крови, дает возможность определить специфические антитела (иммуноглобулины) к определенному виду возбудителя. Метод ИФА основан на следующем:

  • в ответ на внедрение микроорганизма иммунная система начинает вырабатывать антитела;
  • иммунокомплексы отличаются специфичностью и уничтожают только чужеродные клетки;
  • при добавлении в сыворотку крови больного экстракта возбудителей, если имеются антитела, образуется стандартное соединение: антитело-антиген, при этом происходит активное выделение ферментов.

О положительном или отрицательном тестировании в лаборатории судят по тому, произошла ли реакция в плазме после добавления к ней возбудителя, и насколько интенсивным был процесс.

Норма для здорового человека – это единичные иммунокомплексы или их отсутствие.

Анализ ИФА не указывает на какое-то определенное заболевание, он позволяет лишь предположить примерно тип возбудителя, вызвавшего появление иммунокомплексов и определить стадию воспалительного процесса. Это позволяет скорректировать дальнейшие методы диагностики.

Об иммуноглобулинах

Что такое иммуноглобулин, многим понятно: иммунный комплекс, образовавшийся в ответ на проникновение чужеродных клеток. Но какими они бывают?

ИФА метод позволяет выделить 5 разновидностей иммуноглобулинов:

Основными для диагностики считаются A, M и G (некоторые источники по диагностике указывают только три этих иммунных комплекса), поэтому стоит рассмотреть их особенности:

  • А – отвечает за защиту слизистых. При острых патологиях он появляется в крови спустя 14 дней после инфицирования, а иногда и позже и исчезает через 8 недель от начала проявления признаков болезни. Если иммунокомплекс IgA сохраняется дольше, то можно предположить переход заболевания в хроническую форму. Антивирус А указывает на поражение слизистой мочевого пузыря, кишечника или органов дыхания.
  • М – служит указателем острой фазы заболевания. Отмечается в плазме спустя 5 дней от момента проникновения инфекции (даже если нет выраженных признаков заболевания) и исчезает через 6 недель, если происходит разрешение острого процесса.
  • G – остаточная реакция и иммунокомплексы сохраняются длительное время (иногда на протяжении всей жизни) и предотвращает повторное инфицирование или возникновение рецидивов. На формировании антител G основан принцип вакцинации, когда при введении ослабленных микробов и вирусов у человека вырабатывается длительный иммунитет. Повышение G – показатель того, что возбудитель повторно проник в организм или обострилась хроническая инфекция.
Читать еще:  Диагностика женского организма

Иммуноферментный анализ крови на E и D не входит в обязательную программу обследования. Он назначается в следующих случаях:

  • Е – когда предполагают, что патология вызвана паразитами;
  • D – если есть вероятность, что патология имеет системный характер или возникла по причине возникшего иммунодефицита.

Анализ крови методом ИФА дает возможность обнаружить специфические антитела к чужеродным агентам уже на ранних стадиях патологии. В основе тестирования лежит стандартная реакция антиген-антитело, позволяющая определить наличие антител к возбудителю заболевания.

Показания для лабораторной диагностики

Анализ крови на иммуноферментный анализ показано проводить при подозрении на возникновение следующих патологий:

  • онкология;
  • вирусные гепатиты (при всех типах вируса);
  • герпетические поражения слизистой или кожи;
  • некоторые инфекционные процессы (сальмонеллез, корь, энцефалит, дизентерия);
    сифилис;
  • инфекции, передающиеся половым путем (гонорея, хламидиоз, микоплазмоз и др.);
  • атопические процессы (аллергии);
  • цитомегаловирус;
  • эндокринные сбои;
  • иммунодефицит;
  • бесплодие;
  • глистные инвазии.

Также ИФА анализ крови позволяет спрогнозировать течение некоторых неинфекционных заболеваний:

  • инфаркта;
  • инсульта;
  • неврологических расстройств;
  • почечных патологий.

Также с профилактической целью проводят ИФА во время медосмотров.

ИФА диагностика позволяет выявить более 600 антител к инфекционным и неинфекционным антигенам, что делает исследование незаменимым при выявлении болезни на раннем этапе. Методика ИФА считается наиболее информативной при обследовании на ВИЧ и на онкологию.

На чем основана методика

Кажется, что иммуноглобулинов всего пять, а с их помощью определяется большое количество патологических процессов. Возможно ли такое?

Возможно. Это происходит потому, что подсчет иммуноглобулиновых соединений делается по разным тестам:

  • антинуклеарные тела (указывают на аутоиммунные процессы);
  • ревматоидный фактор (выявляет ревматические поражения);
  • двуспиральные ДНК (выявляется группа белков, появляющихся при системных болезнях);
  • ENA скрин (определяет несколько видов антигенов, свойственных при ревмофакторе или при системных соединительнотканных поражениях);
  • антикардиолипиновые антитела (иммунокомплексы образуются при ВИЧ, эпилепсии и некоторых системных процессах);
  • ANGA скрин (соединения характерны для аутоиммунных процессов);
  • цитрулиновый пептид (антитела появляются при ревматоидном артрите);
  • С-реактивный белок (С-реактивный протеин свидетельствует о наличие острого или обострении хронического процесса);
  • иммунофлюоресцентный анализ (укажет на гормональный сбой или на наличие злокачественных новообразований).

Расшифровка анализа проводится с учетом применяемых методик. Оценка полученных данных довольно сложная и проводится врачом, а для пациентов, желающих перед посещением доктора самостоятельно проанализировать полученные из лаборатории данные, можно предложить следующую таблицу:

В таблице указаны лишь общие сведения. В анализе ИФА при расшифровке врачом учитывается не только наличие иммуноферментных соединений, но и их количество, а также методики, применяемые для проведения исследования.

Преимущества метода

ИФА анализатор довольно часто применяется при дифференциальной диагностике болезней и для контроля качества лечения. Методика имеет ряд преимуществ:

  • Дешевизна. Диагностические наборы стоят относительно недорого.
  • Простота. Нет необходимости в оснащении сложной аппаратурой, и исследование может быть проведено в любой лаборатории.
  • Высокая информативность. Достоверность определения вида антигена около 90 %.
  • Быстрота. Анализатор ИФА автоматизирован, в экстренной лаборатории данные исследования можно получить уже через несколько часов после сдачи биоматериала.
  • Ранняя диагностика. Иммуноглобулины появляются в крови на начальной стадии заболевания.
  • Длительность хранения. Взятый у пациента материал может сохраняться до года.
  • Стадия болезни. Соотношение и основные характеристики обнаруженных в плазме иммуноглобулинов дают возможность определить тяжесть течения и стадию заболевания.
  • Контроль динамики. При проведении лечения ИФА иммуноферментный анализ позволяет проводить коррекцию проводимой терапии в зависимости от лабораторных показателей.
  • Легкость забора биоматериала. Для диагностики достаточно небольшого количества венозной крови.

Анализ крови ИФА высокоинформативен и позволяет выявить патологию на начальном этапе развития, но только на основании лабораторного исследования диагноз не ставится. Окончательная диагностика возможна лишь после полного обследования пациента.

Недостатки методики

Несмотря на ряд преимуществ, исследование крови методом иммуноферментации имеет некоторые недостатки:

  • невозможность со 100% точностью определить вид возбудителя (при некоторых заболеваниях вырабатываются похожие иммуноглобулины);
  • вероятность получения ложноположительного результата (бывает у беременных или при несоблюдении правил подготовки к анализу).

На достоверность диагностики может повлиять следующее:

  • табакокурение и употребление спиртного;
  • нервное перенапряжение или стресс;
  • физические нагрузки;
  • прием некоторых лекарств (кровь сдавать можно только спустя 10 дней после отмены препаратов).

Эти недостатки анализа крови на ИФА не мешают врачам признавать методику наиболее удобной и информативной для выявления болезней на ранних стадиях. При необходимости, для уточнения полученных из лаборатории данных, больным могут назначаться более специфические анализы, позволяющие вернее определить тип возбудителя.

ИФА в паразитологии


IgE свойственен глистным инвазиям, но может появляться в плазме и при некоторых аллергиях (находится в крови в небольшом количестве). Несмотря на вероятность получения ложноположительных реакций, кровь на ИФА часто назначается паразитологами для обнаружения следующих видов паразитов:

  • гельминты;
  • токсоплазма;
  • амебы;
  • трихинеллы;
  • лямблии;
  • простейшие;
  • плоские черви.

Глистные инвазии, как и инфекционные возбудители, вызывают выработку антител Е. Рост в крови этого маркера почти всегда указывает на наличие в организме паразитов (при атопических реакциях он остается на прежнем уровне или незначительно повышается).

Паразиты не обязательно располагаются на слизистой кишечника, они могут проникать в ткани почек, сердца и других органов. Если паразитирование в кишечнике легко выявляется наличием в исследуемом кале яиц, личинок или взрослых особей, то поражение других тканей определяется только при помощи иммуноферментной реакции.

Теперь многим стало понятно, что такое ИФА и уже не пугает загадочное лабораторное сокращение. Действительно, исследование назначается не только для подтверждения заболеваний. Некоторые иммуноферментные тесты (сифилис, ВИЧ) входят в обязательную программу медицинского обследования, и получение отрицательного результата служит показателем здоровья. А если тестирование окажется положительным, то и это не повод для паники: чем раньше начнется лечение обнаруженной болезни, тем благоприятнее прогноз.

Как проводится и что показывает иммуноферментный анализ

Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).

Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).

Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.

Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.

Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.

ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Преимущества метода

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

Недостатки метода

К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Показания к назначению и выявляемые заболевания

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

  1. Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
  • IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
  • IgG к ВИЧ;
  • Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
  • Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
  • Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
  • Ig M и IgG к токсоплазмозу;
  • Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
  • IgG к паразитарным заболеваниям;
  • Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
  • IgG к хеликобактерной инфекции.
  • Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.
  • Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).
  • Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

    Анализируемый биоматериал и особенности его забора

    Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

    Читать еще:  Больно ли биопсия шейки матки

    Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

    Сроки готовности результатов ИФА

    При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

    Расшифровка иммуноферментного анализа

    Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).

    Анализируемые показатели

    • IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
    • IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
    • IgM и IgA ( совместное присутствие ) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
    • IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

    Возможные результаты ИФА

    В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.

    Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

    Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

    Не за­бы­вай­те о под­го­тов­ке к ана­ли­зу: кровь для ИФА бе­рут на­то­щак, за две не­де­ли па­ци­ен­ту же­ла­тель­но пре­кра­тить при­ем ан­ти­био­ти­ков и дру­гих про­ти­во­ви­рус­ных пре­па­ра­тов. Если че­ло­век при­ни­ма­ет ка­кие-ли­бо ле­кар­ст­ва по­сто­ян­но, нуж­но со­об­щить об этом вра­чу.

    Иммуноферментный анализ ифа

    Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на высокоспецифической иммунологической реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. В результате реакции фермента с хромогенным субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.

    Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:

    1. Стадия узнавания исследуемого соединения специфическим антителом;
    2. Стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания;
    3. Стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал.

    В реакции участвуют:

    • Твердая фаза;
    • АГ и АТ;
    • Конъюгат (антиген или антитело, меченые ферментом);
    • Ферментный маркер;
    • Субстрат;
    • Стоп-реагент (чаще всего применяют серную кислоту).

    Твердая фаза

    В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.

    Антигены и антитела

    АГ и AT, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. АГ должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант.
    Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые АТ могут быть поли- или моноклональными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgG1, IgG2).
    Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации АГ (AT) в образцах.

    Ферментные маркеры: наибольшее применение нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза.

    Субстраты

    Выбор субстрата, в первую очередь, определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция «фермент-субстрат» высокоспецифична.

    • Для ПХ в качестве субстрата используют 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин (ТМБ хромоген). Происходит цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанного определяемого вещества;
    • Для ЩФ субстратом является 4-нитрофенилфосфат;
    • β-D-галактозидаза катализирует гидролиз лактозы с образованием глюкозы и галактозы.


    Классификация ИФА

    В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов:

    1 — по типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА:

    • В конкурентном ИФА на первой стадии в системе присутствуют одновременно анализируемое соединение и его аналог, меченный ферментом и конкурирующий за центры специфического связывания с ним;
    • Для неконкурентных методов характерно присутствие на первой стадии только анализируемого соединения и специфичных к нему центров связывания.

    2 — по принципу определения исследуемого вещества:

    • Прямое определение концентрации вещества (АГ или АТ). Используют антитела к исследуемому веществу, соединенные со специфической меткой. В этом случае метка будет находиться в образовавшемся специфическом комплексе АГ-АТ. Концентрация определяемого вещества будет прямо пропорциональна регистрируемому сигналу;
    • Непрямое определение концентрации вещества – по разности общего числа мест связывания и оставшихся свободными центров связывания. Концентрация определяемого вещества при этом будет возрастать, а регистрируемый сигнал снижаться, следовательно, в данном случае прослеживается обратная зависимость от величины регистрируемого сигнала.

    3 — по типу результатов:

    • Количественный;
    • Полуколичественный;
    • Качественный.


    Конкурентный ИФА

    1. На твердой фазе иммобилизованы специфические моноклональные антитела;
    2. В лунки панелей вносят в известной концентрации антиген, меченный ферментом, и исследуемый образец. Параллельно в соседних лунках ставят положительный и отрицательный контроли. Для построения калибровки используют стандартный немеченый антиген в различных разведениях. Проводят инкубацию и отмывку;
    3. Добавляют субстрат, инкубируют, останавливают реакцию при развитии оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
    4. Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества обратно пропорциональна оптической плотности.

    Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.


    Неконкурентный «сэндвич» – вариант ИФА

    Основным достоинством метода является высокая чувствительность, превосходящая возможности других схем ИФА.

    1. На твердой фазе иммобилизованы моноклональные антитела или аффинно-очищенные поликлональные антитела;
    2. В лунки панелей вносят исследуемый образец, параллельно ставят положительный контрольный образец и отрицательный контрольный образец в различных разведениях. Инкубируют и отмывают;
    3. В лунки вносят меченные ферментом моноклональные или поликлональные антитела —конъюгат. После инкубации проводят отмывку для удаления несвязавшихся антител;
    4. Вносят субстрат, инкубируют. Реакцию останавливают при достижении оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
    5. Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества прямо пропорциональна оптической плотности.

    Качественный анализ часто используют при скрининговых исследованиях и диагностике инфекционных заболеваний. Результат исследования определяется при сравнении его оптической плотности с расчетной величиной критической оптической плотности (ОПкрит., «Cut-off»).

    Формулу для расчета «Cut-off» указывают в инструкции к тест-системе. В расчете «Cut-off» могут участвовать как усредненные значения оптических плотностей положительных и отрицательных контролей, так и оптическая плотность специального контрольного образца — контроля уровня среза.
    Если оптическая плотность образца выше, чем Cut-off, образец считается положительным на специфические антитела.

    Для полуколичественного варианта проведения методики рассчитывают отношение между средней оптической плотностью образца и оптической плотностью Cut-off.

    Образцы рассматриваются как:

    • положительные, если отношение более 1,1;
    • сомнительные, если отношение 0,9–1,1;
    • отрицательные, если отношение менее 0,9.

    Сомнительные результаты анализа нельзя однозначно интерпретировать и для уточнения результата необходимо повторить обследование через 1–2 недели.


    Методом ИФА определяют
    :

    • Гормоны;
    • Онкомаркеры;
    • Антитела (IgG, IgM) к возбудителям заболеваний — ToRCH-инфекций, туберкулеза, сифилиса, к вирусу гепатита С (ат ВГС), микоплазме, хламидиям, лямблиям, Helicobacter pylori и др.;
    • Антигены вирусов —гепатит D, Е, А (ВГD, ВГЕ, ВГА), гепатит С (ВГСсore), гепатит В (НВs, НВе НВсore);
    • Аутоиммунные заболевания.

    ИФА анализ крови

    Иммуноферментный анализ крови (ИФА) проводится для комплексной оценки защитных функций организма. В ходе проведения исследования определяется количество и свойства иммунных клеток, присутствие необходимых антител. ИФА анализ крови проводится для диагностики инфекционных, гематологических, аутоиммунных заболеваний, первичных и вторичных иммунодефицитов. Рассмотрим, что собой представляет анализ крови методом ИФА, и какие показания существуют для проведения данного исследования.

    Что это такое

    Анализ крови методом ИФА является лабораторным методом, с помощью которого в пробе крови определяют антитела или антигены. Данное исследование используется для выявления уровня иммуноглобулинов, иммунологических комплексов, гормонов.

    Показания к анализу

    Для назначения ИФА анализа крови существуют следующие показания:

    • диагностика инфекций, которые передаются половым путем – уреаплазма, микоплазма, хламидиоз, трихомонада, сифилис;
    • диагностирование вирусных заболеваний – цитомегаловирус, герпес, гепатиты, Эпштейн-Барр вирус;
    • определение уровня гормонов;
    • диагностика онкологических заболеваний;
    • определение иммунодефицита;
    • диагностирование аллергий;
    • предоперационное комплексное обследование перед пересадкой органов;
    • оценка эффективности терапии.

    Принцип метода

    Принцип действия метода иммуноферментного анализа основан на определении в крови специфических белков-антител – иммуноглобулинов. Иммуноглобулины вырабатываются иммунной системой человека при проникновении в организм антигенов (чужеродных микроорганизмов). Такие иммунные молекулы связываются с множеством инфекционных возбудителей в организме и нейтрализуют их.

    Иммуноглобулины обладают важной характеристикой – специфичностью. Благодаря этому они могут связываться с определенным антигеном, образуя комплекс антиген-антитело. Во время проведения ИФА анализа крови именно этот комплекс определяют качественно и количественно.

    Различают иммуноглобулины пяти классов. Но обычно определяют три класса – иммуноглобулины A, M, G. Данные антитела накапливаются в организме в разное время от момента инфицирования.

    • Иммуноглобулины класса М (IgM) появляются в крови самыми первыми на пятые сутки от момента заражения. Они находятся в организме на протяжении 5–6 недель, затем исчезают из кровотока. Антитела IgM указывают на острый период заболевания или обострение болезни при ее хроническом течении.
    • Примерно через 3–4 недели со времени заражения в крови появляются иммуноглобулины класса G (IgG). Они могут существовать в крови человека несколько месяцев или даже лет. Согласно расшифровке ИФА анализа крови, если в двух пробах крови, взятых последовательно через две недели, увеличено количество иммуноглобулинов IgG, говорят о текущей инфекции или реинфекции – повторном заражении той же инфекцией.
    • Иммуноглобулины класса А (IgA) можно выявить данным методом исследования через 2–4 недели после заражения или обострения инфекционной болезни. Из них только 20% циркулирует в крови, остальные находятся в секрете слизистых оболочек. Антитела IgA исчезают из кровотока через 2–8 недель после уничтожения инфекционных агентов. Исчезновение данных иммуноглобулинов означает излечение от инфекции. Если после окончания болезни определено присутствие в крови антител IgA, значит, заболевание перешло в хроническую стадию.

    Подготовка к анализу

    Для проведения анализа крови методом ИФА чаще всего используют кровь человека. Но исследовать также можно содержимое стекловидного тела, спинномозговую жидкость, околоплодные воды.

    Проба крови для исследования берется у пациента из локтевой вены. Сдавать кровь рекомендуется натощак (с момента последнего приема пищи должно пройти не меньше 12 часов). Необходимо сообщить врачу, если пациент принимает лекарственные препараты, так как некоторые из них могут изменить результат анализа. На достоверность результатов исследования влияет прием алкоголя и наркотиков.

    Расшифровка

    В бланке результата данного анализа указывается положительный (+) или отрицательный (-) результат определения каждого класса иммуноглобулинов.

    Рассмотрим интерпретацию возможной расшифровки ИФА анализа крови.

    • Отрицательный результат IgM, IgG, IgA – отсутствие иммунитета к инфекции.
    • Отрицательный результат IgM, IgA и положительный результат IgG – постинфекционный или поствакцинальный иммунитет.
    • Отрицательный или положительный результат IgG, IgA и положительный результат IgM – острая инфекция.
    • Положительный результат IgM, IgG, IgA – обострение хронического инфекционного заболевания.
    • Отрицательный результат IgM и отрицательный или положительный результат IgG, IgA – хроническая инфекция.
    • Отрицательный результат IgM и не определяются IgG, IgA – выздоровление.

    Преимущества метода

    Анализ крови методом ИФА имеет много достоинств. Можно выделить основные из них:

    • относительно высокая точность (чувствительность);
    • возможность проведения ранней диагностики;
    • возможность отслеживания динамики инфекционного процесса;
    • высокий уровень унификации, что позволяет проводить массовые обследования;
    • небольшой промежуток времени, необходимый для получения результата анализа;
    • удобство в работе;
    • автоматизация всех этапов анализа;
    • относительно небольшая стоимость.

    Недостатки

    Недостатком метода ИФА является то, что иногда он дает ложноотрицательные или ложноположительные результаты. Кроме технических ошибок при проведении исследования, причиной ложных результатов может быть ревматоидный фактор у пациента, наличие у него хронических болезней (при которых вырабатываются антитела), нарушения обмена веществ, прием некоторых лекарственных препаратов.

    ИФА анализ крови на паразитов

    С помощью данного метода исследования крови определяют наличие в организме следующих паразитарных процессов:

    • аскаридоз;
    • трихинеллез – анализ проводят несколько раз, максимальный уровень антител определяется на 4–12 неделе после заражения;
    • цистицеркоз;
    • тениоз;
    • фасциолез – антитела определяются в острой стадии заболевания;
    • описторхоз – проводят дифференциальную диагностику между хронической и острой формой болезни;
    • лямблиоз;
    • висцеральный и кожный лейшманиоз;
    • амебиаз;
    • токсоплазмоз.
    Читать еще:  Где сделать маммографию в рыбинске узи

    ИФА анализ крови на паразитов используется для выявления антигенов (паразитов и продуктов их жизнедеятельности) и антител (иммуноглобулинов). Иммуноглобулины вырабатываются в организме как антитела к антигенам. Специфичность данного метода при определении паразитов составляет 90%. С помощью этого анализа можно определить вид паразитов, их количество, и благодаря уровню антител проследить динамику развития процессов.

    ИФА-диагностика: в чем суть, определение антител, как проводят и при каких болезнях эффективна?

    ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA – англ.) вошел в жизнь практической медицины еще где-то в 60-х прошлого столетия. Первоначальной его задачей были гистологические исследования в научных целях, которые сводились к поиску и идентификации антигенной структуры клеток живого организма.

    В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических антител (АТ) и родственных антигенов (АГ) с образованием комплекса «антиген – антитело», который выявляют при помощи фермента. Этот факт натолкнул ученых на мысль, что метод может быть использован в диагностических целях для выявления специфических иммуноглобулинов различных классов, участвующих в иммунном ответе на ту или иную инфекцию. И это был прорыв в клинической лабораторной диагностике!

    Активно использоваться метод начал только в начале 80-х и то, в основном, в специализированных учреждениях. Первыми иммуноферментными анализаторами были снабжены центры и станции переливания крови, инфекционные и венерологические стационары, поскольку рожденный на африканском континенте, появившийся на горизонте у нас и тут же примкнувший к «старым» инфекциям грозный СПИД, требовал незамедлительных мер диагностики и поиска лечебных препаратов, воздействующих на него.

    Область применения метода ИФА

    Возможности иммуноферментного анализа поистине обширны. Теперь и представить себе трудно, как можно обойтись без подобных исследований, применяемых буквально во всех отраслях медицины. Кажется, что может сделать ИФА в онкологии? Оказывается, может. И многое. Способность анализа находить маркеры, свойственные некоторым видам злокачественных новообразований, лежит в основе раннего выявления опухоли, когда другим способом она еще не определяется из-за своих небольших размеров.

    Современная клиническая лабораторная диагностика (КДЛ), кроме онкомаркеров, располагает значительным арсеналом панелей для ИФА и использует их для диагностики различных патологических состояний (инфекционных процессов, гормональных нарушений) и мониторинга фармацевтических лечебных препаратов с целью выявления их влияния на организм больного и, кстати, не только человека. В настоящее время иммуноферментный анализ широко используется и в ветеринарной службе, ведь «братья наши меньшие» тоже подвержены многим заболеваниям, от которых, порой, очень сильно страдают.

    Таким образом, ИФА, благодаря своей чувствительности и специфичности, по образцу крови, взятому из вены, может определить:

    • Гормональный статус (гормоны щитовидной железы и надпочечников, половые гормоны);
    • Присутствие вирусной и бактериальной инфекции (ВИЧ, гепатиты В и С, хламидиоз, сифилис, уреа- и микоплазмоз, герпетическая и TORCH-инфекции, а также многие другие болезни, вызванные патогенными микроорганизмами);
    • Следы жизнедеятельности микроорганизмов, возбудивших инфекционный процесс, который благополучно закончился и перешел в стадию формирования иммунного ответа на этот возбудитель. Такие следы, то есть, антитела, во многих случаях остаются циркулировать в крови пожизненно, чем защищают человека от повторного заражения.

    В чем суть ИФА?

    Иммуноферментный метод, позволяет определить не только присутствие самого возбудителя (качественный анализ), но и его количественное содержание в сыворотке крови больного.

    Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях.

    Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск.

    Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки. Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки.

    Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами. Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд. На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах.

    Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы.

    Видео: современное проведение иммуноферментного анализа

    Результаты ИФА на примере сифилиса

    Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм сифилиса, а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак. В работе используются планшеты с определенной специфичностью (АТ классов А, М, G) или суммарные антитела.

    Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:

    • IgM указывают на продолжительность инфекционного процесса (могут появляться при обострении хронических воспалительных заболеваний);
    • IgA констатируют, что заражение случилось более месяца назад;
    • IgG свидетельствуют о том, что инфекция находится в самом разгаре или о проведенном недавно лечении, что легко выясняется при сборе анамнеза.

    При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования. Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой. Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ).

    Самый волнительный из иммуноферментных анализов – ИФА на ВИЧ

    Анализ на ВИЧ, пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

    Иммуноферментный метод, применяемый для диагностики ВИЧ инфекции, относится к первостепенным стандартным исследованиям, которые, однако, требуют особых условий, поскольку тема очень деликатная.

    ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций, предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным. Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок. Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

    Что можно ожидать от результатов на ВИЧ?

    ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

    Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

    1. Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);
    2. Повторный (+) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;
    3. Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);
    4. Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

    Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

    ИФА находит хламидию, цитомегаловирус и даже паразитов

    Анализы на хламидии и цитомегаловирус иммуноферментным методом также обрели особую популярность, ввиду того, что позволяют определить время заражения, стадию заболевания и эффективность лечебных мероприятий.

    При внедрении хламидии тоже можно наблюдать появление антител различных классов в разных фазах патологического состояния, вызванного инфекционным агентом:

    • IgM могут обнаружиться уже дней через семь после заражения;
    • IgA говорят о том, что инфекция в организме живет уже более месяца;
    • IgG подтверждают диагноз хламидиоза, помогает следить за лечением и определить его действенность. Следует заметить, что антитела класса G остаются и циркулируют в организме независимо от давности болезни, поэтому для правильной расшифровки анализа нужно принимать во внимание референтные значения (нормы), которые, кстати, для каждой КДЛ свои: с учетом марки тест-системы и специфичности реагентов, входящих в набор. Значения нормы вписываются в бланк рядом с результатом ИФА.

    Что касается цитомегаловируса (ЦМВ), то здесь несколько иначе: антитела класса М появляются приблизительно через месяц-полтора, то есть, положительным результат (IgM+) становится в фазе первичного инфицирования или при реактивации скрытой инфекции и остается таковым от 4 месяцев до полугода.

    Наличие АТ класса G характерно для начала первичной острой инфекции или реинфекции. Анализ констатирует, что вирус имеет место, однако информации, в какой стадии находится инфекционный процесс – не дает. Между тем, определение нормы титра IgG тоже вызывает затруднения, так как она целиком зависит от иммунного статуса конкретного человека, который, впрочем, устанавливается выявлением иммуноглобулинов класса G. Учитывая такое поведение антител, при диагностике ЦМВИ возникает необходимость в оценке способностей антител класса G взаимодействовать с ЦМВ, чтобы потом «обезвредить» его (авидность АТ). На начальном этапе болезни IgG очень плохо связываются с антигенами вируса (низкая авидность) и лишь потом начинают проявлять активность, стало быть, можно говорить о повышении авидности антител.

    Алгоритм ИФА-исследований при подозрении на ЦМВ

    Что такое паразиты – вряд ли стоит рассказывать, ведь они преследуют человека, начиная с детского возраста и, в полном смысле слова, отравляют ему жизнь (продукты жизнедеятельности паразитов очень ядовиты). Они бывают внушительных размеров (гельминты, а попросту – глисты) или маленькие (амебы, трихомонады, лямблии).

    До появления в клинической лабораторной диагностике иммуноферментного метода найти паразитов было весьма сложно, теперь же, как говорят: «Нет проблем!». А все потому, что есть ИФА, который отыщет паразита, в какой бы форме тот не пребывал (цисты, личинки, яйца или взрослая особь) и в какой бы части человеческого тела не находился. Для этого нужно лишь взять кровь из вены и найти антитела, которыми организм уже ответил на чужеродные антигены.

    О достоинствах иммуноферментного анализа можно говорить долго и много, ведь этот метод сумел решить многие диагностические задачи, используя лишь венозную кровь. Не нужно долгих ожиданий, волнений и проблем с забором материала для исследования. К тому же тест-системы для ИФА продолжают совершенствоваться и не за горами тот день, когда тест выдаст 100% достоверность результата.

    Видео: учебный фильм МГМУ им. Сеченова об основах ИФА

  • Ссылка на основную публикацию
    Adblock
    detector